WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 


Молекулярные маркёры сифилитической инфекции

На правах рукописи

Терехова Юлия Борисовна

Молекулярные маркёры сифилитической инфекции

03.00.07 микробиология

Автореферат
диссертации на соискание учёной степени
кандидата медицинских наук

Москва — 2008

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова.

Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор
Андрей Юрьевич Миронов
Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, Павел Вячеславович Калуцкий
профессор
доктор медицинских наук, Виктор Николаевич Царёв
профессор

Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет.

Защита состоится «___» _____________ 2008 года в 1400 часов на заседании Диссертационного совета Д. 208.040.08 в ГОУ ВПО Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, Трубецкая ул., 8, строение 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проспект, 49).

Автореферат разослан «___» _____________ 2008 года.

Учёный секретарь
Диссертационного совета Д. 208.040.08
доктор медицинских наук, профессор
Андрей Юрьевич Миронов

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы: По оценкам ВОЗ в 1999 г. в мире зарегистрировано 12 млн. больных сифилисом. Среди всех причин смертности в мире доля сифилиса составила 0,3%. В течение долгого периода заболеваемость сифилисом в развитых странах находилась под контролем, однако в последние годы наблюдается её рост. В США заболеваемость в течение 40 лет оставалась низкой, а с 2000 года количество новых случаев прогрессивно увеличивается. Аналогичная ситуация наблюдается в Канаде и Европе. Большинство случаев сифилиса зарегистрировано у мужчин-гомосексуалистов, из них 75% инфицированы ВИЧ. Взаимосвязь ВИЧ и сифилиса вызывает особую озабоченность, так как описание клинических случаев позволяет предположить, что у ВИЧ инфицированных пациентов, даже после полноценного лечения, нередко развивается нейросифилис.

По данным К. И. Разнатовского и Т. С. Смирновой (2005) в Санкт-Петербурге, несмотря на статистическое снижение уровня заболеваемости сифилисом течение этой инфекции в настоящее время имеет угрожающий характер, что определяет неблагоприятный прогноз на ближайшие годы. Увеличивается количество скрытых (43,2%), поздних (2,63%) и серорезистентных форм (6%), нейросифилиса (5,5%), беременных женщин (5,5%) и детей (18%), больных сифилисом. В 4 раза увеличилось количество случаев нейросифилиса, продолжает регистрироваться третичный сифилис.

Проблема ранней диагностики сифилиса и его органных поражений всегда стояла остро, поскольку в большинстве случаев сифилитический процесс в ЦНС протекает бессимптомно и не имеет чётких клинических признаков.

Медицина XXI века — молекулярная медицина. Основной постулат молекулярной медицины — положение о том, что для каждой болезни, каждого патологического проявления организма имеется молекулярная мишень, которую можно использовать как для диагностики заболевания, так и для лекарственного воздействия. Использование современных технологических и инструментальных разработок существенно расширяет возможности молекулярной диагностики. Методы молекулярной диагностики и прогноза течения сифилитической инфекции на основе современных технологий и, в частности, ГХ-МС биологического материала от больных сифилисом могут решить сложные задачи диагностики скрытых форм сифилиса и его органных поражений.





В связи с вышесказанным, разработка современных недорогих, высокочувствительных и специфических методов лабораторной диагностики сифилиса является актуальной и имеет важное значение для медицинской науки и практического здравоохранения.

Цель исследования: разработка способа индикации молекулярных маркёров органных поражений при сифилитической инфекции на основе хромато-масс-спектрометрического анализа биологических жидкостей организма больного сифилисом.

Задачи исследования. Для достижения указанной цели исследования представлялось необходимым решение следующих задач:

  1. Изучить особенности развития сифилитической инфекции с оценкой скрытых форм сифилиса и органных поражений.
  2. Отработать лабораторную методику индикации молекулярных маркёров органных поражений при сифилисе в биологических жидкостях организма (сыворотка крови, ликвор, моча).
  3. Провести индикацию в биологических жидкостях больных сифилисом методом хромато-масс-спектрометрического анализа молекулярных маркёров поражения ЦНС.
  4. Провести индикацию в биологических жидкостях больных сифилисом методом хромато-масс-спектрометрического анализа молекулярных маркёров поражения почек.
  5. Провести индикацию в биологических жидкостях больных сифилисом методом хромато-масс-спектрометрического анализа молекулярных маркёров поражения кожных покровов и слизистых оболочек.
  6. Провести клинико-хроматографические параллели для оценки эффективности хроматографической индикации молекулярных маркёров при поражениях головного мозга и центральной нервной системы, почек и мочеполовой системы, кожи и слизистых оболочек с уточнением диагноза и локализации поражения, а также определения возможных осложнений.
  7. Сравнить хроматографические характеристики биологических жидкостей организма у больных сифилисом и другой инфекционной и паразитарной патологией (туберкулёз, хирургический сепсис, эхинококкоз и др.).
  8. Определить диагностическую значимость, диагностическую эффективность и диагностическую чувствительность хромато-масс-спектрометрических методов индикации молекулярных маркёров сифилиса.

Научная новизна полученных результатов:

  • Впервые методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии проведена индикация молекулярных маркёров органных поражений (ЦНС, почки, кожные покровы и слизистые оболочки) при сифилисе.
  • Впервые проведён сравнительный анализ хроматографических характеристик биологических жидкостей у больных сифилисом и больных с другой инфекционной и паразитарной патологией (туберкулёз, хирургический сепсис, эхинококкоз и др.).
  • Разработан «Способ лабораторной диагностики изменений центральной нервной системы при сифилисе» (патент РФ на изобретение № 2315303, приоритет от 29 ноября 2006 года).
  • Разработан «Способ лабораторной диагностики инфекционной патологии почек при сифилисе» (патент РФ на изобретение № 2327165, приоритет от 29 ноября 2006 года).
  • Впервые определена диагностическая значимость, диагностическая эффективность и диагностическая чувствительность хромато-масс-спектрометрических методов индикации молекулярных маркёров органных поражений у больных сифилисом.

Практическая значимость исследований. Работа является фрагментом плановой темы НИР кафедры микробиологии с вирусологией и иммунологией ГОУ ВПО Московской Медицинской Академии им. И. М. Сеченова: «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований», № госрегистрации 01.2.006.06352.

Положения, выносимые на защиту:

  1. Методами хромато-масс-спектрометрического анализа в биологических жидкостях больных сифилисом обнаружены органные метаболиты — молекулярные маркёры поражения органов:
    • ЦНС — фосфорная кислота, D-галактоза, D-трентол (D-треоза и её лактон), пировиноградная кислота; метаболиты серотонина и его производных — индолуксусная и индолмасляная кислоты, изомеры глюкозы — - и -глюкоза), D-манноза, рибоза, N-ацетил-DL-триптофан (ацетилированная форма предшественников серотонина), 4-ацетилморфолин;
    • почек — уксусная кислота, 1-1-бензодиокси-5-ол, пропионовая кислота, 2-пропанамид, изомаслянная кислота, 1-4-дитозил-2, 3-изопропил-b-трейтол, маслянная кислота, нитробензен; изовалериановая кислота, 4-4-ацетомидо-2, 2, 6, 6-тетрометил-пиперидино-1-оксил; валериановая кислота, ацетамидо-N-аминооксиметил, капроновая кислота, лауриловая кислота; 2-метил-5-(1-метил-этил)-фенол, 4-4-1-метилэтил-бутил-фенол; фенилуксусная, фенилпропионовая кислоты;
    • кожных покровов и слизистых оболочек — N-N-бис-триметилен-тиурам-дисульфид; глицин-метан-сульфонил-хлорид; 4-4-дигидрокси-сульфонил-сульфон; 1, 1-сульфонил-бис (4-хлор) бензен; 3-ацетил-тио-2метил-S-пропановая кислота и L-метионин-сульфон.
  2. Хроматографические характеристики биологических жидкостей больных сифилисом имеют существенное отличие от биологических жидкостей при других инфекционных и паразитарных заболеваниях (туберкулёз, хирургический сепсис, эхинококкоз).
  3. Доказана эффективность хроматографической индикации молекулярных маркёров поражения головного мозга и центральной нервной системы, почек и мочеполовой системы, кожи и слизистых оболочек для лабораторной диагностики сифилиса.
  4. Определены три группы молекулярных маркёров органных поражений по уровню приоритетности: I группа — метаболиты высокого уровня приоритетности (лактоны, ацетилморфолин, метаболиты триптофана и метаболиты серотонина в ликворе, сернистые соединения в крови, фурановые эфиры бора, фенолы и амиды в моче); II группа — метаболиты среднего уровня приоритетности (хинолоны, липидные компоненты сыворотки крови; сернистые соединения в моче); III группа — метаболиты низкого уровня приоритетности (фенилкарбоновые кислоты и ЛЖК в моче, углеводные компоненты сыворотки крови, изомеры сахаров в ликворе).

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО ММА им. И. М. Сеченова.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

  • научной конференции кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО ММА им. И. М. Сеченова;
  • II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», 26-28 октября 2005 года, Москва;
  • симпозиуме «Магнитные поля и здоровье человека», 18-19 декабря 2007 года, Курск;
  • II международной научной конференции молодых учёных-медиков, 25-28 февраля 2008 года, Курск;
  • V Конференции молодых учёных России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» 19-22 мая 2008 года, Москва;
  • IV Научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицинской биотехнологии» 9-12 сентября 2008 года, Краснодарский край, пос. Джемете;
  • Национальных Днях лабораторной медицины России — научно-практическом симпозиуме «Лабораторная медицина: инновационные технологии в аналитике, диагностике, образовании, организации» 7-9 октября 2008 года, Москва;
  • совместной научной конференции кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО ММА им. И. М. Сеченова и клинико-биохимической лаборатории Института хирургии им. А. В. Вишневского РАМН (31 августа 2007 года, протокол № 9).

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах выполненных в соавторстве, вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической и клинико-бактериологической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрения в практику.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 15 работ, получено 2 патента РФ на изобретение: № 2315303 «Способ диагностики центральной нервной системы при сифилисе» и № 2327165 «Способ диагностики инфекционной патологии почек при сифилисе».

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырёх глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы и приложения. Работа включает 165 страницы текста; 39 таблиц; 19 рисунков. Список литературы содержит 270 источника, из них 214 отечественных и 56 зарубежных.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Методами ГХ-МС анализа исследован биологический материал (кровь, ликвор, моча) от 152 больных сифилисом. Распределение больных по возрасту и полу представлено в табл. 1, по основным формам заболевания в табл. 2.

Таблица 1

Распределение больных по возрасту и полу (n=152)

Пол Возраст (лет) Всего
<15 15-20 21-30 31-40 41-50 51-60 >60 n %
мужчины 3 10 19 18 10 7 2 69 45,5
женщины 4 18 30 16 7 8 83 55,5
Всего: 7 28 49 34 17 15 2 152 100




Таблица 2

Распределение больных сифилисом по формам заболевания

№ п/п Основные формы заболевания Количество больных %
1 Сифилис скрытый ранний 38 25,0
2 Сифилис скрытый поздний 5 3,3
3 Сифилис скрытый не уточненный 3 2,0
4 Сифилис первичный половых органов 16 10,5
5 Сифилис вторичный кожи и слизистых 25 16,5
6 Сифилис вторичный рецидивный 3 2,0
7 Половой и бытовой контакт с больными сифилисом 18 11,8
8 Сероконтроль и обследование 25 16,4
9 Нейросифилис 17 11,2
10 Реинфекция 2 1,3
Всего: 152 100

ГХ-МС исследования периферической крови проведены у 145 больных, мочи — у 72 больных, ликвора — у 17 больных. Из 152 больных положительные серологические пробы (РПГА, РП, РИФ, ИФА) установлены у 121 пациента, отрицательные — у 31 пациента.

Поражения нервной системы (нейросифилис) выявлены у 17 больных (11,2%); поражения мочеполовой системы (циститы, уретриты, пиелонефриты) — у 16 больных (10,5%); поражение кожи и слизистых оболочек — у 25 больных (16,3%).

В качестве контроля хроматографических методов исследования исследованы хроматографические характеристики биологических жидкостей при других патологических состояниях: хирургический сепсис (27 больных), туберкулёз (21 больной), эхинококкоз печени (15 больных). Исследования проводились на материале ФГУ Институт хирургии им. А. В. Вишневского Росмедтехнологий в клинико-биохимической лаборатории КДО (руководитель КДО — доктор биологических наук В. С. Демидова, ответственный исполнитель — старший научный сотрудник КДО В. Г. Истратов).

Хроматографические исследования проводились по разработанной схеме ГХ-МС анализа биологического материала больных сифилисом с переводом исследуемых соединений в ТМС-соединения и идентификации с помощью масс-селективного детектора. Использована ГХ-МС система Agilent 6890 MSD-5973 с масс-селективным детектором и идентификацией соединений с помощью химической станции Chem-Station. Схема ГХ-МС анализа биологического материала представлена в табл. 3.

Индикация активаторов «кооперативной чувствительности» микробов — лактонов, хинолонов, фурановых эфиров бора и родственных соединений проводилась с помощью комплекса методов: ГХ-МС анализа с масс-селективным детектором (Agilent 6890 MSD-5973), ВЭЖХ с масс-селективным детектором и метода капиллярного электрофореза.

Для ГХ-МС исследований использован хроматограф НР-6890 с масс-селективным детектором MSD-5973. Линейный динамический диапазон определяемых концентраций для MSD модели 5973 позволяет для пикограммов образца получать масс-спектры, пригодные для библиотечного поиска. Идентификация соединений проводилась с помощью химической станции GS/MSD-Chem/Station.

Масс-селективный детектор (MSD) модели 5973 позволяет идентифицировать и количественно определить все компоненты сложных биологических матриц. Он обеспечивает классические спектры электронного удара в режиме полного сканирования и регистрации отдельных ионов.

Для максимального эффективного использования возможностей ГХ-МС системы НР-6890 / MSD-5973 предварительно проводили моделирование процесса идентификации органических соединений с помощью программы фирмы Resteck.

В сложных для идентификации химических соединений случаях (незнакомое химическое соединение или низкий уровень содержания вплоть до следовых количеств) использовали скрининговые масс-спектрометрические исследования с применением селективных ионов (2 или 3 ионов характеристичных).

Для подготовки проб биологического материала использовали методы твёрдофазной экстракции с применением специальных предколонок и твёрдофазных картриджей фирмы Agilent.

Статистическую обработку результатов исследования проводили на ПЭВМ Pentium IV. В работе анализировались только статистически достоверные данные. Статистическая обработка данных клинико-лабораторных исследований проводилась с применением многомерной статистики — корреляционного, факторного и кластерного анализов — по программе Гарвардского университета BMDP-2M для биомедицинских исследований. Также использовался пакет прикладных программ Excel версия 7.0, раздел программ «Анализ данных». Различия между сравниваемыми величинами признавались статистически достоверными при уровне значимости p<0,05 по критерию Стьюдента.

При корреляционном анализе использовался коэффициент Юла, который высчитывался с помощью таблицы сопряжённости, а также с помощью корреляционной матрицы программ биомедицинских исследований Гарвардского университета BMDP-2M. Величина коэффициента корреляции указывала на связь между факторами: от 0 до 0,3 — слабой силы, от 0,3 до 0,7 — средней силы, от 0,7 до 0,9 — сильную взаимозависимость, 1 — полную (функциональную) связь.

Для оценки диагностической значимости разработанных хроматографических критериев, использовали унифицированные критерии пригодности лабораторных тестов для диагностики определенной формы патологии, применённые R. Galen и S. Gambino (1975) и В. В. Меньшиковым (1982) основанные на решении теоремы Байеса (расчёт вероятности распределения результатов исследования).

Результаты исследования и их обсуждение

Трудности диагностики сифилиса обусловлены широкой распространённостью заболевания, возможностью поражения любых органов и тканей, наличием скрытых форм заболевания, отсутствием диагностических возможностей раннего выявления органных поражений.

Таблица 3

Схема ГХ-МС анализа биологического материала

Биологический материал

(биоптаты тканей, сыворотка крови, биологические жидкости)

Гомогенизация материала депротеинизация сульфосалициловой кислотой
экстрагирование 1 мл гексана кислотный гидролиз 2,5 N HCl в течение 6 час при t 370 С выпаривание до сухого остатка Твердофазная экстракция
перевод в ТМС-соединения с помощью BSTFA водная фаза растворение в метаноле Запись масс-спектра
хромато-масс-спектрометрия перевод в ТМС-соединения с помощью BSTFA перевод в ТМС-соединения с помощью BSTFA хромато-масс-спектрометрия
Липидные компоненты Оксикислты хромато-масс-спектрометрия Лактоны
Жирные кислоты Аминосахара Хинолоны
Изомеры жирных кислот Моносахара Углеводные компоненты Фурановые эфиры
Моносахара
Аминосахара
Субъединицы ЛПС

Использование ГХ-МС позволяет с высокой степенью достоверности определить ранние признаки сифилитической инфекции и органных поражений в биологических жидкостях организма, наличие поражения органов и систем при отсутствии положительных серологических реакций и клинических проявлений болезни.

Они реализованы для исследования крови, мочи и ликвора.

В крови больных обнаружены липидные и углеводные соединения: высшие жирные кислоты и их изомеры (С13:0 и изомеры С13:0; С14:0 и С15:0; изомеры С16:0 и С16:0; С17:0 и С18:0; изомеры С19:0 и С20:0; С20:0 и С21:0). Также обнаружен холестерин и его эфиры, сквален. Среди углеводных компонентов присутствовали изомеры сахаров и ацетилированных сахаров — глюко-пираноза, манноза и манноза ацетат; сахароза, ацетил-сахароза и изомеры ацетил сахарозы, а также ацетилированные амины сахаров — N-ацетил-маннозамин и N-ацетил-глюкозамин.

Интересно обнаружение в крови сернистых соединений. Идентифицированы: L-метионин-сульфон — модифицированная аминокислота с сульфонильной группировкой; 1-1-сульфонил-бис (4-хлор) бензен с высокой токсичностью хлорированного остатка, ацетилированная 2-метил-S-пропановая кислота с тиогруппой и выраженным деструктивным действием, а также 4-4-дигидрокси-дифенилсульфон, N-N-бис-тетраметилен-тиурам-дисульфид и бензен-метан-сульфонилхлорид в минимальных концентрациях. Уровень их содержания был достаточно низок — 0,02±0,003 ммоль/л для минимальных значений и 0,09±0,008 ммоль/л для максимальных. Даже сравнительно невысокое содержание сернистых метаболитов в крови больных обладает достаточно выраженным повреждающим действием, поскольку эти соединения имеют сродство к коллагеновым структурам и способны повреждать ткани с развитием некроза и последующим распадом.

Важное значение имеет идентификация в крови соединений, относящихся к «активаторам кооперативной чувствительности микробов» — бутиролактон; 2, 3, 6, 7-тетрагидро-1-Н-5-Н-бензохинолон, 2,2-бихинолин; N-N-диметил-метамин-тригидро-боран и 2-фуранил-2-пропиеновая кислота. Известно, что генетический механизм реализации «кооперативной чувствительности» позволяет патогенным бактериям рационально использовать свой патогенный потенциал, определяя системой quorum sensing момент включения генов патогенности только после достижения бактериями определенной плотности популяции, при которой синтезирующееся количество факторов патогенности гарантирует успешное развитие инфекционного процесса. Рассматривая сифилитическую инфекцию как септикоподобное состояние, мы предложили использовать наличие активаторов «кооперативной чувствительности» в сыворотке крови для прогнозирования риска генерации инфекции.

При индикации молекулярных маркёров органных поражений использован опыт диагностики возможной локализации поражения при сепсисе с помощью ГХ-МС образцов крови больных [Истратов В. Г., Жуков А. О., 1999; Истратов В. Г. с соавт., 1995; Жуков А. О., 1998].

В моче кроме классических ЛЖК, фенолов и крезолов, идентифицирован ряд сернистых соединений и амидов, которые по нашему мнению, причастны к развитию почечных осложнений у больных сифилисом. С другой стороны, они связаны с вторичной инфекцией, проявляющейся в почечной патологии за счёт нарушения иммунной реактивности.

Исследования ликвора позволили оценить глубокие обменные и функциональные изменения, происходящие в тканях головного мозга при развитии сифилитической инфекции. Обнаружение в ликворе таких соединений, как предшественники и метаболиты окситриптомина позволяют делать выводы о существенных изменениях метаболической активности и функциональных способностях головного мозга. Особо следует обратить внимание на идентификацию естественных морфолиновых структур, обладающих сходными с опиатами частями структурной формы и действующими как транквилизаторы или естественные опиатоподобные структуры. Однако обнаружение такого соединения как тиоморфолин свидетельствует об опасности не только нарушения, но и разрушения определенных структур мозга, учитывая высокую токсичность идентифицированного соединения.

В качестве контроля изучены хроматографические показатели биологических жидкостей больных с инфекционной и паразитарной патологией (хирургический сепсис — 27 больных, туберкулёз — 21 больной и эхинококкоз печени — 15 больных). Молекулярные маркёры характерные для органных поражений при сифилисе при других видах патологии не выявлены.

Содержание активаторов кооперативной чувствительности в периферической крови больных сепсисом в основном совпадало с содержанием этих соединений в крови больных сифилисом, за исключением некоторого повышения содержания фурановых эфиров. Это соответствует нашему представлению о септикоподобном течении сифилиса с генерализацией инфекции на фоне резкого снижения системы антиинфекционной резистентности с участием разных как грамположительных, так и грамотрицательных видов микробов.

Спектр липидных соединений в периферической крови больных сепсисом отличался от спектра хроматографических изменений в периферической крови больных сифилисом. У больных сепсисом суммарное содержание ЛЖК составило 2,613±0,486 ммоль/л, а так называемых токсических метаболитов — 6,212±0,689 ммоль/л. В сыворотке больных сифилисом определялось высокое содержание жирных кислот и их изомеров с нечётным числом углеродных атомов, не определяющиеся в нормальной сыворотке крови.

Содержание маркёров органных поражений в периферической крови больных сепсисом отличалось от маркёров органных поражений у больных сифилисом. Это прежде всего касалось церебротоксических метаболитов — ди- и полиаминов и ароматических аминов, как показателей обширного распада тканей при сепсисе и появлении интоксикационной энцефалопатии в отличие от углеводных компонентов периферической крови больных сифилисом, предшественников и метаболитов триптофана в ликворе больных сифилисом.

Высокое содержание фенолов, крезолов и ароматических жирных кислот в периферической крови больных сепсисом при воспалительном поражении почек соответствовало высокому уровню содержания указанных соединений в моче больных сифилисом при поражении почек и мочеполового аппарата сифилитическим процессом. Определяемые у больных сифилисом в моче с помощью методов селективного ГХ-МС анализа молекулярные маркёры отсутствовали у больных сепсисом.

В группе больных туберкулёзом методами ГХ-МС-анализа в периферической крови обнаруживались микоцирозиновые кислоты и туберкулостеариновая кислота, которые не определялись у больных сифилисом.

В группе больных с эхинококкозом типичным являлось обнаружение метаболитов фарнезола-2-цис, 6-транс-фарнезола и 2-транс, 6-транс-фарнезола, а так же оболочечные метаболиты типа изомеров лейцина и изолейцина, что так же не обнаруживалось у больных сифилисом.

Прослежено распределение основных метаболитов по величине удельного веса (по данным факторного анализа). Первые шесть мест заняли метаболиты серотонина и триптофана и ацетилморфолин в ликворе, лактоны и сернистые соединения в моче и крови. В первой десятке — фенолы и амиды в моче, хинолоны и изомеры сахаров в ликворе.

Проведено распределение основных групп метаболитов на I, II и III уровни (молекулярные маркёры высокого, среднего и низкого уровня приоритетности). Критериями распределения были избраны величины удельного веса хроматографических тестов на основании факторного анализа, их сопоставимость с клиническими результатами и, наконец, сведения по диагностической эффективности распределения данных.

К молекулярным маркёрам высокого уровня приоритетности (метаболиты первого уровня) отнесены следующие метаболиты: активаторы кооперативной чувствительности — лактоны; ацетилморфолин в ликворе; метаболиты триптофана в ликворе; метаболиты серотонина в ликворе; сернистые соединения в крови; активаторы кооперативной чувствительности; фенолы в моче; амиды в моче.

Диагностическая эффективность молекулярных маркёров высокого уровня приоритетности составляла по диагностической чувствительности — от 55,9% до 96,7%; по положительной диагностической предсказуемости — от 62,5% до 94,1%. Сопоставимость клинических и хроматографических данных составила от 72,7% до 96,9%, уровень удельного веса — от 0,744 до 0,903 (с 1 по 11 место).

К молекулярным маркёрам среднего уровня приоритетности (метаболиты второго уровня) отнесены следующие метаболиты: активаторы кооперативной чувствительности — хинолоны; липидные компоненты сыворотки крови; сернистые соединения в моче.

Диагностическая эффективность молекулярных маркёров среднего уровня приоритетности составляла: по диагностической чувствительности от 75,0% до 94,5%; по положительной диагностической предсказуемости от 75,0% до 80,9%.

Таблица 4

Параметры диагностической значимости молекулярных маркёров сифилиса (в %)

ГХ-МС показатели Диагностическая эффективность (%)
ДЧ ДС ДПпол. ДПотр.
Индикация активаторов «кооперативной чувствительности» микробов Лактоны (бутиролактон) 95,9 44,4 88,9 44,4
Хинолоны (2,3,6,7-тетрагидро-1-н-5-н-бензохинолон) 94,5 61,6 80,9 25,0
Фурановые эфиры бора (N-N-диметил-метамин-дигидроборан и 2-фуранил-2пропиеновая кислота) 96,7 50,0 88,1 60,0
Биохимические изменения сыворотки крови Сернистые соединения 88,2 80,0 94,1 60,0
Липидные компоненты 93,3 50,0 80,0 83,3
Углеводные компоненты 69,2 75,0 61,5 33,3
Индикация молекулярных маркёров органных поражений Нервная система (головной мозг) Метаболиты серотонина (индолуксусная и индолмасляная кислоты) 75,0 25,0 62,5 50,0
Метаболиты триптофана (ацетилированные формы триптофана) 88,8 60,0 77,7 80,0
Ацетилморфолин 80,0 75,0 90,0 50,0
Изомеры сахаров в ликворе 85,7 20,0 43,2 80,0
Почки Сернистые соединения в моче 75,0 50,0 75,0 50,0
Фенолы и амиды в моче 88,8 80,0 88,8 80,0
Фенилкарбоновые кислоты в моче 71,4 25,0 57,1 50,0
ЛЖК в моче 66,6 45,3 33,6 41,2

Сопоставимость клинических и хроматографических данных составила от 75,0 до 83,9%; уровень удельного веса (по данным факторного анализа) — от 0,611 до 0,819 (6-14 места).

К молекулярным маркёрам низкого уровня приоритетности (метаболиты третьего уровня) отнесены следующие метаболиты: фенилкарбоновые кислоты в моче; углеводные компоненты сыворотки крови; изомеры сахаров в ликворе; ЛЖК в моче.

Диагностическая эффективность молекулярных маркёров низкого уровня приоритетности составила: диагностическая чувствительность — от 66,6 до 85,7%; диагностическая предсказуемость положительная — от 33,6 до 80,0%. Сопоставимость клинических и хроматографических данных составила от 50,0 до 72,2%. Величина удельного веса (по данным факторного анализа) составила от 0,605 до 0,756 (10-15 места). Параметры диагностической значимости молекулярных маркёров сифилиса (в %) представлены в табл. 4.

Предложенные молекулярные маркёры сифилитической инфекции и органных поражений при сифилисе легли в основу «Способа лабораторной диагностики изменений центральной нервной системы при сифилисе» (патент РФ на изобретение № 2315303, приоритет от 29 ноября 2006 года) и «Способа лабораторной диагностики инфекционной патологии почек при сифилисе» (патент РФ на изобретение № 2327165, приоритет от 29 ноября 2006 года).

Выводы:

  1. В ликворе больных сифилисом определены молекулярные маркёры поражения ЦНС: D-галактоза, D-трентол, пировиноградная кислота; метаболиты серотонина и его производных — индолуксусная и индолмасляная кислоты; изомеры глюкозы — - и -глюкоза, D-манноза, рибоза, N-ацетил-DL-триптофан (ацетилированная форма предшественников серотонина), 4-ацетилморфолин (ацетилированная форма гетероциклического амина), являющиеся продуктами деградации наиболее активных субстратов ЦНС — фосфатидилинозитола и фосфатидилэтаноламина.
  2. В моче больных сифилисом определены молекулярные маркёры поражения почек: летучие жирные кислоты — уксусная, пропионовая, изомаслянная, маслянная, изовалериановая, валериановая, капроновая, лауриловая; ароматические жирные кислоты — фенилуксусная и фенилпропионовая, 1-1-бензодиокси-5-ол, 2-пропанамид; 1-4-дитозил-2, 3-изопропил-b-трейтол; нитробензен; 4-4-ацетомидо-2, 2, 6, 6-тетрометил-пиперадино-1-оксил; ацетамид-N-аминооксиметил, 2-метил-5-(1-метил-этил)-фенол, 4-4-1-метилэтил-бутил-фенол, являющиеся продуктами нарушенного метаболизма углеводов и аминокислот при развитии вторичной инфекции мочеполовой сферы.
  3. В крови больных сифилисом определены молекулярных маркёров поражения кожных покровов и слизистых оболочек: сернистые соединения, обладающие высокой токсичностью и тропизмом к коллагену, что и обусловливает поражение кожи и подкожной клетчатки.
  4. В крови больных сифилисом определены соединения, которые относятся к группе активаторов «кооперативной чувствительности» микробов и родственные соединения: бутиролактон, 2, 3, 6, 7-тетрагидро-1-Н-5-Н-бензохинолон, N-N-диметил-метамин-тригидро-боран, 2,2-бихинолин и 2-фуранил-2-пропиеновая кислота.
  5. Хроматографические характеристики биологических жидкостей больных сифилисом существенно отличаются от биологических жидкостей при других инфекционных и паразитарных заболеваниях (туберкулёз, хирургический сепсис, эхинококкоз).
  6. Лабораторные диагностические критерии ГХ-МС индикации молекулярных маркёров органных поражений имеют высокий уровень диагностической чувствительности, диагностической специфичности, диагностической предсказуемости положительной и отрицательной.
  7. Определены 3 группы молекулярных маркёров по уровню приоритетности: I группа — метаболиты высокого уровня приоритетности — лактоны, ацетилморфолин, метаболиты триптофана и серотонина в ликворе, сернистые соединения в крови, фурановые эфиры бора, фенолы и амиды в моче; II группа — метаболиты среднего уровня приоритетности — хинолоны, липидные компоненты сыворотки крови, сернистые соединения в моче; III группа — метаболиты низкого уровня приоритетности — фенилкарбоновые кислоты и ЛЖК в моче, углеводные компоненты сыворотки крови, изомеры сахаров в ликворе.

Практические рекомендации:

  1. При обнаружении в моче больных сифилисом методами хромато-масс-спектрометрического анализа молекулярных маркёров 1-1-бензодиокси-5-ол, 2-пропанамид; 1-4-дитозил-2, 3-изопропил- b -трейтол; 4-4-ацетомидо-2, 2, 6, 6-тетрометил-пиперадино-1-оксил; ацетамидо-N-аминооксиметил, 2-метил-5-(1-метил-этил)-фенол, 4-4-1-метилэтил-бутил-фенол; фенилуксусная и фенилпропионовая кислоты в количестве: 0,03-0,05ммоль/л; 0,07-0,09 ммоль/л; 0,09-0,11 ммоль/л; 0,04-0,06 ммоль/л; 0,05-0,07 ммоль/л; 0,07-0,10 ммоль/л; 0,11-0,13 ммоль/л и 0,13-0,16 ммоль/л соответственно, диагностируют воспалительное поражение почек.
  1. При обнаружении в ликворе больных сифилисом молекулярных маркёров: N-ацетил-DL-триптофан; индолуксусную и индолмасляную кислоты и 4-ацетилморфолин в количестве 0,11-0,13 ммоль/л; 0,08-0,12 ммоль/л; 0,04-0,06 ммоль/л и 0,07-0,09 ммоль/л соответственно, диагностируют поражение ЦНС.
  2. При обнаружении в периферической крови больных сифилисом молекулярных маркёров: N-N-бис-тетраметилен-тиурам-дисульфид; глицин-метан-сульфонил-хлорид; 1,1-сульфонил-бис(4-хлор)-бензен; 3-ацетил-тио-2-метил-S-пропановая кислота; L-метионин-сульфон в количестве: 0,017-0,054 ммоль/л, 0,02 ммоль/л, 0,026-0,065 ммоль/л, 0,053-0,089 ммоль/л, 0,035-0,076 ммоль/л и 0,064-0,098 ммоль/л соответственно диагностируют поражения наружных покровов и слизистых оболочек.
  3. При использовании в диагностических целях молекулярных маркёров необходимо учитывать их диагностическую значимость по уровню приоритетности: высокий уровень приоритетности — I группа: лактоны, ацетилморфолин, метаболиты триптофана и серотонина в ликворе, сернистые соединения в крови, фурановые эфиры бора, фенолы и амиды в моче. Средний уровень приоритетности — II группа: хинолоны, липидные компоненты сыворотки крови, сернистые соединения в моче. Низкий уровень приоритетности — III группа: фенилкарбоновые кислоты и ЛЖК в моче, углеводные компоненты сыворотки крови, изомеры сахаров в ликворе.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации:

  1. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Осман К. А., Терехова Ю. Б. Индикация молекулярных маркёров Treponema pallidum // Тез. докл. II международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность». - М., 2005. – С. 193.
  2. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Воробьёв А. А., Осман К. А., Терехова Ю. Б., Романовская Л. М. Индикация молекулярных маркёров Treponema pallidum в лабораторной диагностике сифилиса // Молекулярная медицина. – 2005. - № 4. – С 58-63.
  3. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Осман К. А., Терехова Ю. Б. Индикация молекулярных маркёров Treponema pallidum. // Клиническая лабораторная диагностика. – 2005. - № 9. – С. 60.
  4. Терехова Ю. Б., Миронов А. Ю., Истратов В. Г., В., Осман К. А. Индикация молекулярных маркёров нейросифилиса // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2007. - № 2. - С. 59-66.
  5. Миронов А. Ю., Терехова Ю. Б. Современные методы диагностики сифилиса // Consilium Medicum. Дерматология. – 2007. - № 1. – С. 34-40.
  6. Терехова Ю. Б., Миронов А. Ю., Истратов В. Г. Новые подходы к индикации Treponema pallidum // Труды симпозиума «Магнитные поля и здоровье человека». Курск – 2007. - С. 95.
  7. Терехова Ю. Б., Миронов А. Ю. Современные методы лечения сифилиса // Consilium Medicum. Дерматология. – 2007. - № 2. – С. 41-46.
  8. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Осман К. А., Рубальский О. В., Терехова Ю. Б. Способ лабораторной диагностики изменений центральной нервной системы при сифилисе // Патент РФ № 2315303, приоритет от 29 ноября 2006 года. – Зарегистрирован в Гос. реестре изобретений РФ 20. 01. 2008.
  9. Терехова Ю. Б., Миронов А. Ю., Истратов В. Г., В., Осман К. А. Индикация молекулярных маркёров инфекционной патологии почек при сифилисе // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2007. - № 4. - С. 68-74.
  10. Терехова Ю. Б., Осман К. А. Молекулярная диагностика сифилитической инфекции // Материалы II международной научной конференции молодых учёных-медиков в 3-х томах. – Курск, 2008. – Т. 1. - С. 212-213.
  11. Терехова Ю. Б. Молекулярные маркёры сифилитической инфекции // Вестник РАМН. Приложение – 2008. - № 6. – С. 430.
  12. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Терехова Ю. Б., Рубальский О. В., Осман К. А. Способ диагностики инфекционной патологии почек при сифилисе // Патент РФ № 2327165, приоритет от 29 ноября 2006 года. – Зарегистрирован в Гос. реестре изобретений РФ 29.06.2008.
  13. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., В., Осман К. А., Терехова Ю. Б., Рошо Р. А. Новые диагностические возможности лабораторной диагностики сифилиса мочеполовой системы. // Клиническая лабораторная диагностика. – 2008. - № 9. – С. 51.
  14. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., В., Осман К. А., Терехова Ю. Б., Рошо Р. А. Инновационные технологии лабораторной диагностики нейросифилиса // Клиническая лабораторная диагностика. – 2008. - № 9. – С. 54.
  15. Терехова Ю. Б., Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Осман К. А. Газо-жидкостная хроматографии и масс-спектрометрия в лабораторной диагностики сифилиса // Тез. докл.VII научно-практической конференции «Социально-значимые заболевания в дерматологии. Новые лекарственные препараты в дерматологии и косметологии». - М., 2008. – С. 169.

Список сокращений:

АГ – антиген;

АТ – антитело;

АМК – аминокислотные компоненты;

АТ – антитело;

ГХ-МС – газовая хроматография-масс-спектрометрия;

ДС – диагностическая специфичность;

ДЧ – диагностическая чувствительность;

ЗППП – заболевания, передающиеся половым путём;

ИО – истинно отрицательные;

ИП – истинно положительные;

ИФА – иммуноферментный анализ;

КСР – комплекс серологических реакций;

ЛК – лактоны;

ЛК – липидные компоненты;

ЛО – ложноотрицательные;

ЛП – ложноположительные;

МПБ – мясо-пептонный бульон;

НС – нервная система;

Протр – предсказуемость отрицательная;

ПРпол – предсказуемость положительная;

ПЦР – полимеразная цепная реакция;

РА – реакция агглютинации;

РИБТ – реакция иммобилизации бледной трепонемы;

РИТ (РИБТ) – реакция иммобилизации бледных трепонем;

РИФ – реакция иммунофлюоресценции;

РИФ – реакция иммунофлюоресценции;

РМП – реакция микропреципитации;

РПГА – реакция пассивной гемагглютинации;

РПР – реакция преципитации;

РСК – реакция связывания комплемента;

ФЭ – фурановые эфиры;



 


Похожие работы:

«АГЕЕВ Сергей Андреевич КОНСТРУИРОВАНИЕ АТТЕНУИРОВАННЫХ ШТАММОВ YERSINIA  PESTIS С ПОНИЖЕННОЙ РЕАКТОГЕННОСТЬЮ 03.02.03– микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оболенск – 2010 Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав...»

«киршева надежда алексеевна СТРУКТУРА ЛИПОПОЛИСАХАРИДОВ И ИЗБИРАТЕЛЬНАЯ ВИРУЛЕНТНОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ФОТОРАБДОЗА 03.02.03 – микробиология 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оболенск – 2013 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки...»

«МАРКОВА Юлия Александровна ПОЛИГОСТАЛЬНОСТЬ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ НА МОДЕЛИ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С РАСТЕНИЯМИ 03.02.03-микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Иркутск – 2013 Работа выполнена в ФГБУ Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека Сибирского отделения Российской академии медицинских наук ГБОУ ДПО Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования Министерства...»

«Жадченко Юлия Викторовна Распространенность стафилококков в популяции лиц, живущих в крупном промышленном городе 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: доктор...»

«Шамова Ольга Валерьевна Молекулярно - клеточные основы реализации биологической активности антимикробных пептидов лейкоцитов 14.03.03 – патологическая физиология 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в Отделе общей патологии и патофизиологии Федерального государственного бюджетного учреждения Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного отделения...»

«ГАЛЯМОВА Гульмира Калелбаевна БИОГЕОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ ДРЕВЕСНЫХ КУЛЬТУР Г. УСТЬ-КАМЕНОГОРСКА 03.02.08 – Экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Астрахань 2013 Работа выполнена в РГП на ПХВ Семипалатинский государственный педагогический институт ФГБОУ ВПО Астраханский государственный технический университет Научный руководитель : Панин Михайл Семенович, доктор биологических наук, профессор Научный...»

«Миняев Михаил Владимирович Комплексное моделирование процесса измерения биохимического потребления кислорода в жидких инкубационных средах 03.00.04 - биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Тверь - 2007 Работа выполнена на кафедре биомедицины Тверского государственного университета Научный руководитель доктор химических наук, профессор Ворончихина Людмила Ивановна Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Лапина...»

«Новикова Ирина Александровна КОРРЕКЦИЯБИОХИМИЧЕСКОГО СТАТУСА У ВЫСОКОПРОДУКТИВНЫХ КОРОВ ПРИ КЕТОЗАХ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОГО КОМПЛЕКСА 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Курск – 2013 Диссертационная работа выполнена в ФГБОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет. Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Ярован Наталья Ивановна Официальные оппоненты:

«НОВЫЕ ПОСТУПЛЕНИЯ В БИБЛИОТЕКУ Авторефераты Январь-2013 1. Аббасова, Самира Фуад кызы. Возможности видеоэндоскопического хирургического лечения хронического калькулезного холецистита у лиц пожилого возраста : автореферат диссертации. кандидата медицинских наук : 14.01.17 / С. Ф. Аббасова ; Российский университет дружбы народов (М.), кафедра госпитальной хирургии. - М. : б. и., 2013. - 19 с. Экземпляры: всего:1 - анл(1). 2.

«МИХАЙЛОВА ЛЮДМИЛА ВИКТОРОВНА БИОЛОГИЯ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫЗЫВАЮЩИХ КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ 03.02.03 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских...»

«Жиренкина Екатерина Николаевна Особенности очага висцерального лейшманиоза в Папском районе Наманганской области Узбекистана 03.02.11 – паразитология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Понировский Евгений...»

«ПЕСТОВ АРТУР ЮРЬЕВИЧ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ БИОЦЕНОЗА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ КАРИЕСЕ 03.02.03 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2012 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации. Научный...»

«ВАСИЛЬЕВА ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА ЭПИЗООТОЛОГИЯ ТРЕМАТОДОЗОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СИСТЕМЫ ПРОТИВОТРЕМАТОДОЗНЫХ МЕРОПРИЯТИЙ В РЕСПУБЛИКЕ АЛТАЙ Специальность 03.02.11 - Паразитология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Тюмень – 2010 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Российской академии сельскохозяйственных наук Научный...»

«ГАЕВСКАЯ НАТАЛЬЯ ЕВГЕНЬЕВНА ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ БАКТЕРИОФАГОВ ХОЛЕРНЫХ И ПАРАГЕМОЛИТИЧЕСКИХ ВИБРИОНОВ 03.02.03 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Ростов-на-Дону 2013 Работа выполнена в Федеральном казённом учреждении здравоохранения Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии ФГУН ГНЦ ПМБ ИГНАТОВ СЕРГЕЙ ГЕОРГИЕВИЧ РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ СОВРЕМЕННЫХ МЕТОДОВ ИЗУЧЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОНАНОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ 03.02.03 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Оболенск – 2010 Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Государственный научный...»

«ПРЯМЧУК СЕРГЕЙ ДМИТРИЕВИЧ идЕНТиФИкациЯ СПЕЦИФИЧНЫХ МАРКЕРОВ ДЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ МНОЖЕСТВЕННО-устойчивЫХ ГОСПИТАЛЬНЫХ ШТАММОВ ENTEROBACTERIACEAE 03.02.03 микробиология 03.02.07 генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оболенск – 2011 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и...»

«Блохина Светлана Викторовна ЭПИЗО ОТО ЛОГИЯ ЦИСТНО ГО ЭХИНОКОККОЗ А В ОМСКОЙ О Б ЛАСТИ 03.00.19 - паразитология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Тюмень - 2009 Работа выполнялась в ФГУ ВПО Омский государственный аграрный университет и в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии СО...»

«СВЕТОЧ ТАТЬЯНА ЭДУАРДОВНА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТР И СТИКА V АНТИГЕНА YERSINIA PESTIS 03.02.03-микробиология 03.01.06-биотехнология (в том числе бионанотехнологии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических нау...»

«ШИШКИН ЯКОВ СЕРГЕЕВИЧ Снижение экологической нагрузки полигонов ТБО на объекты гидросферы на завершающих этапах жизненного цикла 03.00.16 - экология АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Пермь 2007 Работа выполнена в Пермском государственном техническом университете Научный руководитель: доктор технических наук, доцент Глушанкова Ирина Самуиловна Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Басов Вадим Наумович кандидат...»

«Богун Александр Геннадьевич Использование молекулярно-генетических методов для комплексного анализа штаммов Mycobacterium tuberculosis 03.02.03 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оболенск 2010 г. Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Государственный научный центр прикладной...»







Загрузка...



 
2014 www.avtoreferat.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.