WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Стандартизация сырья, настоек гомеопатических матричных и ферментированных каланхоэ и хвоща

На правах рукописи

Волжанова Марина Игоревна

СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ, НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ И ФЕРМЕНТИРОВАННЫХ КАЛАНХОЭ И ХВОЩА

14.04.02 – Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Москва – 2010 г.

Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов»
(ГОУ ВПО РУДН) на кафедре общей фармацевтической и биомедицинской технологии (заведующий кафедрой академик РАМН и РАСХН В.А.Быков).

Научный руководитель:
Кандидат фармацевтических наук, доцент Светлана Николаевна Суслина
Официальные оппоненты:
Доктор фармацевтических наук, профессор Зинаида Петровна Костенникова
Кандидат фармацевтических наук Янина Федоровна Копытько

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Воронежский государственный университет»

Защита диссертации состоится «___» ____________ 2010 г.
в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01
во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН (117216, г. Москва, ул. Грина, 7) по адресу: 123056, г. Москва,
ул. Красина, д. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, 7.

Автореферат разослан: «___»_________ 2010 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 006.070.01, доктор фармацевтических наук А.И.Громакова

Актуальность темы. Одной из актуальных задач современной фармацевтической науки является создание отечественной Гомеопатической фармакопеи. В Российской Федерации отмечается значительное развитие гомеопатического производства, а также увеличение объемов регистрации новых гомеопатических препаратов и реализации их на фармацевтическом рынке, что диктует необходимость разработки и внедрения унифицированных стандартов качества на них. Необходимость создания Гомеопатической фармакопеи продиктована, в частности, отставанием нормативной базы от темпов производства гомеопатии в нашей стране.

В настоящее время действуют общие фармакопейные статьи (ОФС)||«Настойки гомеопатические матричные», «Настойки гомеопатические матричные ферментированные» и фармакопейные статьи (ФС) на настойки гомеопатические матричные (НГМ), но отсутствуют ФС на настойки гомеопатические матричные ферментированные (НГМФ), которые применяют для изготовления ряда гомеопатических лекарственных средств (ГомЛС). Качество ГомЛС обеспечивается строгим соблюдением технологии изготовления и использованием стандартизованных субстанций, в связи с этим остается актуальным совершенствование методов контроля качества и стандартизации НГМ и НГМФ.

В частности, своевременным является создание ФС на НГМ и НГМФ каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, а также хвоща полевого.
В отечественной медицине достаточно широко применяют ЛС на основе лекарственного растительного сырья каланхоэ перистого и хвоща полевого, вместе с тем каланхоэ Дегремона практически не представлено. Разработанные методики качественного и количественного определения основной группы биологически активных веществ сырья с помощью современных химических и физико-химических методов являются отправной точкой в разработке методик сквозной стандартизации НГМ каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, а также НГМ и НГМФ хвоща полевого и лекарственных форм на основе НГМ и НГМФ.

Цель и задачи исследования. Целью работы является исследование по стандартизации сырья каланхоэ Дегремона и перистого, настоек гомеопатических матричных и ферментированных на его основе, а также настоек гомеопатических матричных и ферментированных хвоща полевого.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

  1. Провести сравнительный фармакогностический анализ свежесобранного сырья каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого;
  2. Провести сравнительные исследования фенольных соединений НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого и разработать методики их стандартизации;
  3. Провести исследования фенольных соединений и разработать методики стандартизации НГМ и НГМФ хвоща полевого;
  4. Разработать методики установления подлинности гомеопатических разведений НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, а также НГМ и НГМФ хвоща полевого;
  5. Разработать методики стандартизации для проектов ФС «Побеги каланхоэ свежие», «Настойка гомеопатическая матричная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe», «Настойка гомеопатическая матричная ферментированная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe ferm 1.2», «Настойка гомеопатическая матричная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense», « Настойка гомеопатическая матричная ферментированная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense ferm 2.2»;
  6. Разработать проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) «Каланхоэ ферм суппозитории ректальные гомеопатические».

Научная новизна. На основании макро- и микроскопического анализа впервые установлены диагностически значимые признаки в морфологическом и анатомическом строении сырья каланхоэ Дегремона, а также впервые изучены в сравнительном аспекте морфолого-анатомические признаки двух видов рода Каланхоэ – каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого.



На основании проведенного сравнительного фармакогностического анализа свежесобранных побегов каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого, а также опыта применения в гомеопатии ГомЛС на основе данных видов сырья установлена возможность их совместного применения.

Впервые изучен качественный и количественный состав фенольных соединений в НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, а также НГМ и НГМФ хвоща полевого. Применение современных физико-химических методов, в частности, хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), спектрофотометрии в УФ- и видимой области спектра, позволило разработать методики стандартизации НГМ и НГМФ, которые являются промежуточным звеном сквозной стандартизации.

Показана возможность разработки лекарственной формы на основе НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны:

  1. Проект ФС «Побеги каланхоэ свежие»;
  2. Проект ФС «Настойка гомеопатическая матричная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe»;
  3. Проект ФС «Настойка гомеопатическая матричная ферментированная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe ferm 1.2»;
  4. Проект ФС «Настойка гомеопатическая матричная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense»;
  5. Проект ФС «Настойка гомеопатическая матричная ферментированная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense ferm 2.2»;
  6. Проект ФСП «Каланхоэ ферм суппозитории ректальные гомеопатические».

Связь задач и исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертация выполнялась в Российском университете дружбы народов на кафедре общей фармацевтической и биомедицинской технологии № темы 030601-2-073 по Государственному Контракту ГК П555/05.08.2009 – НК-97П, Проект: «Биоинженерия как основа мобилизации адаптивного потенциала биообъектов – суперпродуцентов БАВ». В соответствии с Федеральной целевой программой «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009 - 2013 гг., в рамках реализации мероприятия №|1.2.1 «Проведение научных исследований научными группами под руководством докторов наук».

Апробация работы. Результаты экспериментальных исследований доложены на VI Всероссийской научной конференции «Биомедицинские технологии» в 2008|г., а также на Московских международных гомеопатических конференциях «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» в 2008 - 2010 гг.

Публикации. По материалам исследований опубликовано 14 работ.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Результаты сравнительного фармакогностического исследования свежесобранного сырья каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого;
  2. Результаты разработки методик качественного и количественного анализа фенольных соединений в сырье каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого,
    НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, обеспечивающих сквозную стандартизацию; результаты валидации методик анализа;
  3. Результаты разработки методик качественного и количественного анализа действующих веществ в НГМ и НГМФ хвоща полевого; результаты валидации методик анализа;
  4. Результаты разработки методики установления подлинности гомеопатических разведений НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, а также НГМ и НГМФ хвоща полевого;
  5. Разработка проектов ФС на сырье каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого, НГМ каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, НГМ и НГМФ хвоща полевого, проекта ФСП на суппозитории ректальные гомеопатические Каланхоэ ферм.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 177 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава I), четырех глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 194 источника, в том числе 123 иностранных, 6 приложений. Работа содержит 53 рисунка и 79 таблиц.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, представлена научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании обзора данных литературы представлено ботаническое описание, данные по химическому составу, применению в аллопатии и гомеопатии препаратов на основе сырья каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, а также хвоща полевого. Приведены описания стандартизации и контроля качества сырья, НГМ в зарубежных фармакопеях.

Во второй главе приведены сведения об объектах изучения, о методах и приборах, используемых в экспериментах.

Третья глава посвящена фармакогностическому анализу сырья каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, установлению показателей, позволяющих идентифицировать сырье и контролировать его качество.

В четвертой главе представлен фитохимический анализ НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, НГМ и НГМФ хвоща полевого с использованием современных физико-химических методов, результаты разработки показателей качества сырья, НГМ и НГМФ, а также методики анализа гомеопатических разведений НГМ и НГМФ.

Пятая глава содержит результаты разработки лекарственной формы на основе НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого – суппозиториев ректальных гомеопатических Каланхоэ ферм.

Основное содержание работы

1. Объекты и методы исследования

Объекты исследования – свежесобранное сырье каланхоэ Дегремона (Kalanchoe daigremontiana Hamet et Perr.), каланхоэ перистого (Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers.), семейства толстянковые (Crassulaceae), заготовленное в 2007-2009 гг. в Отделе культурных растений Главного ботанического сада им. Н.В.Цицина РАН, Москва; ЛРС хвоща полевого, заготовленное в
2007-2009 гг. в Воскресенском районе Московской области. НГМ и НГМФ изготовлены на базе производственного отдела ООО|«Лекарственные средства ВАЛА-Р», Москва.

Для изучения анатомо-диагностических признаков в строении сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого использовался микроскоп ЛОМО «МИКМЕД-1» с бинокуляром АУ-12 1,5 (окуляр 10 и объективы 3,7, 8, 20, 40). Микрофотографии выявленных диагностических признаков были выполнены с помощью цифровой фотокамеры Sony Cyber-schot и отредактированы в программе Adobe Photoshop CS Version 8.0.

Изучение архитектуры поверхности листьев двух растений проводилось на базе Центра коллективного пользования (научно-образовательного центра) РУДН с применением растрового электронного микроскопа марки JEOL JSM-6490, Япония, после нанесения 24 нм платины в автоматическом коутере JEOL auto fine coater JFC-1600.

Микроскопические исследования проводили согласно ОФС «Методы анализа лекарственного растительного сырья», раздел «Листья» и «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» ГФ XI, вып. 1, с. 252-256, с. 277-279.

Товароведческие показатели устанавливали в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 1; ГФ XII, ч. 1; ГОСТ 24027.2-80 «Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла».

Для экстракции и приготовления хроматографических систем использовали растворители марки «Ч», «ХЧ», «ЧДА». Разделение веществ и их идентификацию осуществляли методом ТСХ на пластинах «Силикагель 60 F254 Merck». Были использованы стандартные образцы (СО) фенольных соединений, предоставленные отделом контроля качества
ООО «Лекарственные средства ВАЛА-Р»: рутин (Carl Roth, 7178.1-100G), гиперозид (Carl Roth, 4215.1-25MG), галловая кислота (Sigma-Aldrich, G3784-100G), кофейная кислота (Carl Roth, 5869.1-10G), хлорогеновая кислота (Sigma-Aldrich, C3878-250MG), феруловая кислота (Sigma-Aldrich, 46278-1G-F), п-кумаровая кислота (Sigma-Aldrich, С9008-5G), кверцетин (Carl Roth, 7138.1-25G), кемпферол (Fluka, 60010), апигенин-7-гликозид (Sigma-Aldrich,
44692-5MG-F).

Исследования по изучению состава фенольных соединений опытных образцов НГМ И НГМФ методом ВЭЖХ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе (насосы ВЭЖХ Beckman114M Solvent Delivery Module «A» и «В»; контроллер Beckman 421A; детектор с переменной длиной волны Spectroflow 757; миксер Beckman System Organizer, Германия; самописец Kipp and Zonen, Голландия) на базе Института биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН.

Спектры поглощения в УФ- и видимой области спектра регистрировались с помощью спектрофотометра Cary WinUV фирмы Varian, США. Валидация аналитических методик проводилась в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».

Содержание сухого остатка, плотность, величину pH, испытания на микробиологическую чистоту НГМ и НГМФ проводили в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 2; ГФ XII, ч. 1.

Оценку качества изготовленных суппозиториев ректальных гомеопатических осуществляли согласно ГФ XI, вып. 2, с. 151 и
ОСТ 91500.05.001 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».

2. Фармакогностический анализ сырья

каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого и хвоща полевого

Макроскопический анализ сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого

Свежесобранное сырье каланхоэ Дегремона представляет собой куски облиственных побегов длиной до 50 см, отдельные листья. Стебли сочные, неопушенные, цилиндрические, темно-зеленого цвета. Нередко на стеблях в узлах имеются придаточные корни. Листья супротивные, черешковые, удлиненно-треугольные, мясистые, сочные, с верхней стороны темно-зеленые, с нижней – светло-зеленые нередко наблюдаются прожилки красно-фиолетового цвета, по краю листья имеют глубокие зубцы красно-фиолетового цвета, в которых, как правило, развиваются новые побеги с листочками и воздушными корнями. В нижней части стеблей, черешков и оснований жилок листьев наблюдается красновато-фиолетовый оттенок. Запах слабый.

Согласно ФС 42-1782-82 «Побеги каланхоэ свежие» побеги каланхоэ перистого свежие представляют собой облиственные побеги длиной от 60|см до 1|м, листья и их части. Стебли сочные, голые, в нижней части цилиндрические, в верхней – четырехгранные; светло-зеленые или серовато-зеленые. Листья супротивные, длинночерешковые, мясистые, сочные; нижние листья эллиптические или яйцевидные, по краю городчатозубчатые; верхние иногда перистые или непарноперистые с 3-5 яйцевидными эллиптическими или удлиненно-эллиптическими, городчатозубчатыми листочками; с верхней стороны зеленые, реже желтоватые или серо-голубоватые от воскового налета или с красноватым от антоциана оттенком, с нижней – сизо-зеленые. Верхушка листа закругленная, основание клиновидное, иногда неравнобокое. Пластинка листа голая, жилкование перистое. По краю листа могут находиться выводковые почки, из которых развиваются молодые растения. В нижней части стеблей, черешков и оснований жилок листьев наблюдается нередко красновато-фиолетовый оттенок. Запах слабый.

Микроскопический анализ сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого

В микропрепарате листа каланхоэ перистого согласно ФС 42-1782-82 «Побеги каланхоэ свежие» должны быть видны: клетки эпидермиса верхней и нижней сторон листа крупные, с извилистыми стенками; устьица с обеих сторон очень мелкие, овальной формы, анизоцитного типа; под верхним эпидермисом – крупные многоугольные клетки субэпидермального слоя, образующие под устьицами крупные межклетники.

Рисунок 1 – Фрагмент эпидермы верхней стороны листа каланхоэ перистого (20) Рисунок 2 – Фрагмент эпидермы верхней стороны листа каланхоэ Дегремона (20)
Рисунок 3 – Фрагмент эпидермы нижней стороны листа каланхоэ перистого (20) Рисунок 4 – Фрагмент эпидермы нижней стороны листа каланхоэ Дегремона (20)

В приготовленных микропрепаратах верхней (рис. 1) и нижней (рис. 3) сторон листа каланхоэ перистого видны все вышеуказанные признаки. Описание микроскопии рекомендуем дополнить уточнением: стенки клеток верхней эпидермы менее извилистые, по сравнению со стенками клеток нижней эпидермы.

В микропрепаратах верхней стороны листа каланхоэ Дегремона видны крупные клетки эпидермиса со слабоизвилистыми, почти прямыми стенками, мелкие устьица анизоцитного типа (рис.|2). В микропрепаратах нижней стороны листа – крупные клетки эпидермиса со слабоизвилистыми стенками, мелкие устьица анизоцитного типа (рис. 4).

Рисунок 5 – Устьице верхней стороны листа каланхоэ перистого Рисунок 6 – Устьице верхней стороны листа каланхоэ Дегремона
Рисунок 7 – Фрагмент эпидермы верхней стороны листа каланхоэ перистого Рисунок 8 – Фрагмент эпидермы верхней стороны листа каланхоэ Дегремона

В результате исследований архитектуры поверхности с помощью растрового электронного микроскопа (рис. 5-8) выявлено, что кутикула листовой пластинки каланхоэ перистого мелкоскладчатая, покрыта восковыми образованиями цилиндрической формы. Кутикула листьев каланхоэ Дегремона образует крупные складки, более выраженные на нижней стороне листа. Устьица каланхоэ Дегремона погруженные, в отличие от устьиц каланхоэ перистого, которые располагаются выше уровня листовой пластинки.

Товароведческий анализ сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого

При разработке проекта ФС на свежесобранные побеги каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого установлены числовые показатели, характеризующие доброкачественность сырья.

Фитохимический анализ сырья каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, а также хвоща полевого

Разработаны методики качественного определения основной группы БАВ – фенольных соединений, а также проведен их сравнительный анализ в свежесобранных побегах каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого.

Для качественного анализа фенольных соединений в свежесобранных побегах каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого использовали метод ТСХ, имеющий высокую чувствительность и селективность.

Аналитическую пробу сырья измельчали до образования кашицы.
В колбу вместимостью 50|мл помещали около 1,0000|г (точная навеска) измельченного сырья, заливали 10|мл этанола 96|%, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение
30 мин. Испытуемый раствор охлаждали, фильтровали.

В качестве раствора сравнения применяли 1|% растворы СО фенольных соединений: кверцетина, кемпферола, рутина, гиперозида, апигенин-7-гликозида, кофейной, галловой, кумаровой, феруловой, хлорогеновой кислот в метаноле.

Для разделения различных групп фенольных соединений использовали хроматографические пластины «Силикагель 60 F254 Merck». Качественное разделение обеспечивает подвижная фаза (ПФ) этилацетат-уксусная кислота-вода (ЭУВ) (2:1:1). Зоны адсорбции фенольных соединений обнаруживали в УФ-свете при длине волны 365|нм, а также обрабатывали 1|% раствором дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира и 5|% раствором
макрогола 400.

Обнаружены следующие фенольные соединения: рутин, гиперозид, галловая кислота, кофейная кислота, п-кумаровая кислота, кверцетин, кемпферол.

Разработаны методики количественного определения фенольных соединений в сырье каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, а также проведен сравнительный анализ количественного содержания фенольных соединений в сырье обоих видов; разработаны методики количественного определения фенольных соединений в траве хвоща полевого. Дифференциальный вариант спектрофотометрии позволил исключить влияние на результаты анализа сопутствующих веществ, имеющих оптическую плотность в области максимума поглощения извлечений из сырья.

Рисунок 7 – УФ-спектр фенольных соединений: 1 – кислоты галловой СО; 2 – извлечение из побегов каланхоэ Дегремона свежих; 3 – растворитель (плацебо) Рисунок 8 – УФ-спектр фенольных соединений: 1 – кислоты галловой СО; 2 – извлечение из побегов каланхоэ перистого свежих; 3 – растворитель (плацебо)

Рекомендуем установить норму содержания суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую и абсолютно сухое сырье для сырья каланхоэ Дегремона не менее 6,0|%, для сырья каланхоэ перистого не менее 5,0|%.

Метрологические характеристики методик (табл.|1) свидетельствуют, что относительная ошибка единичного определения с 95|% вероятностью не превышает 5,96|% для сырья каланхоэ Дегремона и 1,08|% для сырья каланхоэ перистого.

Таблица 1 – Метрологические характеристики методик количественного определения
Xср S2 S Sx Px t(P, f) X , %
Побеги каланхоэ Дегремона свежие
6,489 0,0293 0,1711 0,0541 0,95 2,26 0,3867 5,96
Побеги каланхоэ перистого свежие
5,328 0,00644 0,0802 0,0254 0,95 2,26 0,1814 1,08

Отсутствие систематической ошибки методик подтверждено в опытах с добавками кислоты галловой непосредственно к навеске сырья перед экстракцией (табл. 2). Для подтверждения воспроизводимости разработанных методик проведена их валидация.

Таблица 2 – Результаты опытов с добавками кислоты галловой к сырью
Взято в сырье, г Добавлено кислоты галловой, г Должно быть, г Найдено, г Ошибка
Абсолютная, г Относительная, %
1 2 3 4 5 6
Побеги каланхоэ Дегремона свежие
0,06489 0,0162225 0,0811 0,0817 + 0,0006 + 0,740
0,06489 0,032445 0,0973 0,0968 – 0,0005 – 0,514
0,06489 0,0486675 0,1136 0,1141 + 0,0005 + 0,440
0,06489 0,06489 0,1298 0,1292 – 0,0006 – 0,462
Побеги каланхоэ перистого свежие
0,05328 0,01332 0,06660 0,06675 + 0,00015 + 0,225
0,05328 0,02664 0,07992 0,07981 – 0,00011 – 0,138
0,05328 0,03996 0,09324 0,09341 + 0,00017 + 0,182
0,05328 0,05328 0,01066 0,01061 – 0,00005 – 0,469

Разработана методика количественного определения суммы фенольных соединений в траве хвоща полевого.

Рис. 9. УФ-спектр фенольных соединений:1 – кислоты хлорогеновой СО; 2 – извлечение из травы хвоща полевого; 3 – растворитель (плацебо)

Рекомендуем установить норму содержания суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту хлорогеновую и абсолютно сухое сырье для травы хвоща полевого не менее 4,5%.

Метрологические характеристики методики (табл.|3) свидетельствуют, что относительная ошибка единичного определения с 95 % вероятностью не превышает 1,20 %.

Таблица 3 – Метрологические характеристики методики количественного определения
Xср S2 S Sx Px t(P, f) X , %
Трава хвоща полевого
5,005 0,00712 0,0844 0,0267 0,95 2,26 0,1907 1,20

Для подтверждения воспроизводимости разработанной методики проведена ее валидация. Отсутствие систематической ошибки методик подтверждено в опытах с добавками кислоты хлорогеновой непосредственно к навеске сырья перед экстракцией (табл. 4).

Таблица 4 – Результаты опытов с добавками кислоты хлорогеновой к сырью
Взято в сырье, г Добавлено кислоты галловой, г Должно быть, г Найдено, г Ошибка
Абсолютная, г Относительная, %
Трава хвоща полевого
0,05005 0,012513 0,06256 0,06264 + 0,00008 + 0,128
0,05005 0,025025 0,07508 0,07498 – 0,00010 – 0,133
0,05005 0,037538 0,08759 0,08771 + 0,00012 + 0,137
0,05005 0,050050 0,1001 0,0999 – 0,00020 – 0,200

Разработка показателей качества сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого

Для характеристики свежесобранных побегов каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого, используемых в качестве сырья для изготовления ГомЛС, предложены следующие показатели: описание внешних признаков сырья, микроскопические признаки, качественные реакции, числовые показатели, количественное определение содержания фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую.

Для установления подлинности сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого предлагаем проводить качественные реакции на наличие фенольных соединений: реакция с 2|% спиртовым раствором хлорида алюминия, цианидиновая проба.

Испытуемый раствор: аналитическую пробу сырья измельчают до образования кашицы. Около 1,0000|г (точная навеска) измельченного сырья, заливают 10|мл этанола 70|% и кипятят в течение 5|мин, охлаждают, фильтруют.

Подлинность сырья предлагаем также определять методом ТСХ.

Неподвижная фаза (НПФ) – готовые хроматографические пластины «Силикагель 60 F254 Merck», ПФ – ЭУВ (2:1:1). Раствор сравнения: 1|% растворы рутина, гиперозида, галловой кислоты в метаноле.

Испытуемый раствор: аналитическую пробу сырья измельчают до образования кашицы. В колбу вместимостью 50|мл помещают около 1,0000|г (точная навеска) измельченного сырья, заливают 10|мл этанола 96|%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Испытуемый раствор охлаждают, фильтруют.

В УФ-свете при длине волны 365 нм на хроматограмме должны быть видны три основные зоны адсорбции, соответствующие растворам сравнения рутина Rf около 0,55, гиперозида Rf около 0,60, имеющие оранжевую флюоресценцию, кислоты галловой Rf около 0,90, имеющую ярко-голубую флюоресценцию.

Хроматограмму обрабатывают 1|% раствором дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира и 5|% раствором макрогола 400, оценивают в дневном свете.

Для сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого предлагаем установить нормы: суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую и абсолютно сухое сырье не менее 5|%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 30|%, извлекаемых этанолом 70|%, не менее 20|%; влажность не менее 85|%; золы общей не более 6|%; золы, не растворимой в 10|% растворе хлористоводородной кислоты, не более 0,25|%; листьев, в том числе отделенных при анализе, не менее 70|%; органической примеси не более 0,5|%; минеральной примеси не более 0,5|%.

По результатам исследований разработан проект ФС на свежесобранные побеги каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого, используемые в качестве сырья для изготовления ГомЛС – «Побеги каланхоэ свежие – Cormi Kalanchoёs recentes».

3. Фитохимический анализ НГМ и НГМФ каланхоэ и хвоща

НГМ каланхоэ Дегремона и гомеопатические разведения изготавливали по методу 2 ОФС 42-0027-05 «НГМ» из свежесобранных побегов каланхоэ Дегремона. НГМ каланхоэ перистого и гомеопатические разведения изготавливали по методу 2 ОФС 42-0027-05 «НГМ» из свежесобранных побегов каланхоэ перистого.

НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого и гомеопатические разведения изготавливали по методу 1.2 ОФС 42-0008-02 «НГМФ» из свежесобранных побегов каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого.

Анализ фенольных соединений, содержащихся в НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого и НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого осуществляли методом ТСХ.

Приготовление испытуемого раствора. В делительную воронку помещают 2,5|мл НГМ (НГМФ), добавляют 10|мл этилацетата, встряхивают в течение 10|мин. Отделяют органическую фазу в колбу вместимостью 50|мл с притертой пробкой. Повторяют экстракцию 5|мл этилацетата. Органические фазы объединяют и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 0,5|мл метанола.

В качестве раствора сравнения – 1|% растворы СО фенольных соединений: кверцетина, кемпферола, рутина, гиперозида, апигенин-7-гликозида, кофейной, галловой, кумаровой, феруловой кислот в метаноле.

Для разделения различных групп фенольных соединений использовали хроматографические пластины «Силикагель 60 F254 Merck». Наилучшее разделение достигнуто в ПФ ЭУВ (2:1:1). Зоны адсорбции фенольных соединений обнаруживали в УФ-свете при длине волны 365|нм, а также обрабатывали 1|% раствором дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира и 5|% раствором макрогола 400.

Сравнительный анализ состава фенольных соединений в НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого и НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого подтвердил, что существенных отличий в компонентном составе не наблюдается.

Применение дифференциального варианта спектрофотометрии, позволило разработать для сквозной стандартизации методики количественного определения суммы фенольных соединений в НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого и НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого в пересчете на кислоту галловую.

Рис. 10. УФ-спектр фенольных соединений НГМ каланхоэ Дегремона: 1 – кислоты галловой СО; 2 – испытуемый раствор; 3 – растворитель (плацебо) Рис. 11. УФ-спектр фенольных соединений НГМ каланхоэ перистого: 1 – кислоты галловой СО; 2 – испытуемый раствор; 3 – растворитель (плацебо)

Рекомендуем установить норму содержания суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую в НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого – не менее 1,5|%, в НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого – не менее 2,5|%.

Рис. 12. УФ-спектр фенольных соединений НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого: 1 – кислоты галловой СО; 2 – испытуемый раствор; 3 – растворитель (плацебо)

Метрологические характеристики методики (табл.|3) свидетельствуют, что относительная ошибка единичного определения с 95|% вероятностью не превышает 3,52 % для НГМ каланхоэ Дегремона, 2,71 % для НГМ каланхоэ перистого, 2,53 % для НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого.

Таблица 3 – Метрологические характеристики методик количественного определения
Xср S2 S Sx Px t(P, f) X , %
НГМ каланхоэ Дегремона
2,10 0,01069 0,1034 0,0327 0,95 2,26 0,23367 3,52
НГМ каланхоэ перистого
1,64 0,00387 0,0622 0,0197 0,95 2,26 0,14056 2,71
НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого
2,74 0,00936 0,0968 0,0306 0,95 2,26 0,21866 2,53

Для подтверждения воспроизводимости разработанных методик проведена их валидация. Отсутствие систематической ошибки методик подтверждено в опытах с добавками галловой кислоты непосредственно к навеске сырья перед экстракцией (табл. 4).

Таблица 4 – Результаты опытов с добавками кислоты галловой
Взято в сырье, г Добавлено кислоты галловой, г Должно быть, г Найдено, г Ошибка
Абсолютная, г Относительная, %
НГМ каланхоэ Дегремона
0,02097 0,00524 0,02621 0,02629 + 0,00008 + 0,305
0,02097 0,01049 0,03146 0,03141 – 0,00005 – 0,159
0,02097 0,01573 0,03670 0,03675 + 0,00005 + 0,136
0,02097 0,02097 0,04194 0,04184 – 0,00010 – 0,238
НГМ каланхоэ перистого
0,01643 0,0041075 0,02054 0,02059 + 0,00005 + 0,243
0,01643 0,0082150 0,02465 0,02458 – 0,00007 – 0,284
0,01643 0,0123225 0,02875 0,02881 + 0,00006 + 0,209
0,01643 0,016430 0,03286 0,03278 – 0,00008 – 0,243
НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого
0,02735 0,006838 0,03419 0,03427 + 0,00008 + 0,234
0,02735 0,013680 0,04103 0,04095 – 0,00008 – 0,195
0,02735 0,020510 0,04786 0,04796 + 0,00011 + 0,230
0,02735 0,027350 0,05470 0,05461 – 0,00009 – 0,165

Результаты исследования фенольных соединений в НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого методом ВЭЖХ представлены на рис. 13, 14.

На основании полученных данных в опытных образцах НГМ и НГМФ идентифицированы: рутин, гиперозид, кверцетин, п-кумаровая кислота.
В НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого идентифицированы также галловая, кофейная кислоты и кемпферол.

ВЭЖХ-хроматограммы выявили отсутствие значимых различий в составе фенольных соединений НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого.

Рисунок 13 – ВЭЖХ-хроматограмма смеси СО: 1 – кофейная кислота; 2 – галловая кислота; 3 – п-кумаровая кислота; 4 – феруловая кислота; 5 – рутин; 6 – гиперозид; 7 – кверцетин; 8 – апигенин-7-гликозид; 9 – кемпферол. Рисунок 14 – ВЭЖХ-хроматограммы фенольных соединений опытных образцов: 1 – смесь СО; 2 – НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого; 3 – НГМ каланхоэ Дегремона; 4 – НГМ каланхоэ перистого

Сравнительный анализ хроматографических профилей фенольных комплексов опытных образцов НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого подтверждает, что различия между видами каланхоэ находятся в границах внутривидовой изменчивости химического состава.

НГМ хвоща полевого изготовили по методу 4 ОФС 42-0027-05 «НГМ», НГМФ хвоща полевого – по методу 2.2 ОФС 42-0008-02 «НГМФ» из высушенной травы хвоща полевого.

Анализ фенольных соединений, содержащихся в НГМ и НГМФ хвоща полевого осуществляли методом ТСХ. В качестве испытуемого раствора применяли НГМ и НГМФ хвоща полевого. В качестве раствора СО –
1% растворы СО фенольных соединений в метаноле: кверцетина, кемпферола, рутина, гиперозида, апигенин-7-гликозида, кофейной, галловой, п-кумаровой, феруловой кислот.

Для разделения различных групп фенольных соединений использовали хроматографические пластины «Силикагель 60 F254 Merck». Наилучшее разделение достигнуто в ПФ бутанол-уксусная кислота-вода (БУВ) (8:1:1). Зоны адсорбции на хроматограммах детектировали в УФ-свете при длине волны 365|нм и обрабатывали 1|% раствором дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира и 5|% раствором макрогола|400.

В УФ-свете при длине волны 365|нм на хроматограмме должны быть видны три основные зоны адсорбции, соответствующие растворам сравнения хлорогеновой кислоты Rf около 0,40, имеющей ярко-голубую флюоресценцию, апигенин-7-гликозида Rf около 0,70, кверцетина Rf около 0,85, имеющим оранжевую флюоресценцию.

Применение дифференциального варианта спектрофотометрии позволило разработать методики количественного определения суммы фенольных соединений в НГМ и НГМФ хвоща полевого.

Рекомендуем установить норму содержания суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту хлорогеновую в НГМ и НГМФ хвоща полевого не менее 0,5%.

Рисунок 15 – УФ-спектр фенольных соединений НГМ хвоща полевого: 1 – испытуемый раствор; 2 – кислоты хлорогеновой СО; 3 – растворитель (плацебо) Рисунок 16 – УФ-спектр фенольных соединений НГМФ хвоща полевого: 1 – испытуемый раствор; 2 – кислоты хлорогеновой СО; 3 – растворитель (плацебо)

Метрологические характеристики методики (табл.|5) свидетельствуют, что относительная ошибка единичного определения с 95|% вероятностью не превышает 5,09|% для НГМ хвоща полевого, 5,39|% для НГМФ хвоща полевого.

Таблица 5 – Метрологические характеристики методик количественного определения
Xср S2 S Sx Px t(P, f) X , %
НГМ хвоща полевого
0,86 0,00376 0,0613 0,0194 0,95 2,26 0,13850 5,09
НГМФ хвоща полевого
0,82 0,00378 0,0615 0,0195 0,95 2,26 0,13901 5,39
Таблица 6 – Результаты опытов с добавками кислоты хлорогеновой
Взято в сырье, г Добавлено кислоты галловой, г Должно быть, г Найдено, г Ошибка
Абсолютная, г Относительная, %
НГМ хвоща полевого
0,0086 0,00215 0,01075 0,01081 + 0,00006 + 0,558
0,0086 0,00430 0,01290 0,01283 – 0,00007 – 0,543
0,0086 0,00645 0,01505 0,01512 + 0,00007 + 0,465
0,0086 0,00860 0,01720 0,01711 – 0,00009 – 0,523
НГМФ хвоща полевого
0,00815 0,0020375 0,01019 0,01023 + 0,00004 + 0,393
0,00815 0,0040750 0,01223 0,01217 – 0,00006 – 0,491
0,00815 0,0061125 0,01426 0,01431 + 0,00005 + 0,351
0,00815 0,0081500 0,01630 0,01623 – 0,00007 – 0,429

Для подтверждения воспроизводимости разработанных методик проведена их валидация. Отсутствие систематической ошибки методик подтверждено в опытах с добавками кислоты хлорогеновой непосредственно к навеске сырья перед экстракцией (табл. 6).

Результаты исследования фенольных соединений в НГМ и НГМФ хвоща полевого методом ВЭЖХ представлены на рис. 13, 17.

Рисунок 17 – ВЭЖХ-хроматограммы фенольных соединений опытных образцов: 1 – смесь СО; 2 – НГМФ хвоща полевого; 3 – НГМ хвоща полевого

На основании полученных данных в опытных образцах идентифицированы: п-кумаровая кислота, феруловая кислота, кверцетин, апигенин-7-гликозид, кемпферол. В НГМФ хвоща полевого идентифицированы также галловая, кофейная кислоты, в НГМ – гиперозид.

ВЭЖХ-хроматограммы выявили отсутствие значимых различий в составе фенольных соединений НГМ и НГМФ хвоща полевого.

Разработка показателей качества, изучение стабильности при хранении НГМ и НГМФ каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого

Для характеристики НГМ каланхоэ Дегремона, каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого предложены следующие показатели качества: состав настойки, описание, подлинность, сухой остаток, содержание спирта (для НГМ), плотность, величина pH (для НГМФ), тяжелые металлы, микробиологическая чистота, количественное определение суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую.

НГМ каланхоэ Дегремона представляет собой прозрачную жидкость светло-зеленого цвета со слабым ароматным запахом. НГМ каланхоэ перистого – прозрачная жидкость светло-зеленого цвета со слабым ароматным запахом. НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого – жидкость оранжево-коричневого цвета с ароматным запахом.

Критерии подлинности НГМ и НГМФ включают качественные реакции на наличие фенольных соединений: реакция с 2|% спиртовым раствором алюминия хлорида, цианидиновая проба.

К 0,5|мл настойки прибавляют 1|мл 2|% cпиртового раствора алюминия хлорида; должно образовываться бледное желто-зеленое окрашивание (фенольные соединения).

К 0,5|мл настойки прибавляют несколько капель хлористоводородной кислоты концентрированной и 0,01|г порошка магния или цинка; должно образовываться красное окрашивание (фенольные соединения).

Подлинность настоек также предлагаем определять методом ТСХ с обнаружением фенольных соединений.

НПФ – готовые хроматографические пластины «Силикагель 60 F254 Merck», ПФ – ЭУВ (2:1:1).

Испытуемый раствор: в делительную воронку помещают 2,5|мл настойки, добавляют 10|мл этилацетата, встряхивают в течение 10|мин. Отделяют органическую фазу в колбу вместимостью 50|мл с притертой пробкой. Повторяют экстракцию 5|мл этилацетата. Органические фазы объединяют и выпаривают. Сухой остаток растворяют в 0,5|мл метанола.

Раствор сравнения: 1|% растворы рутина, гиперозида, галловой кислоты в метаноле.

На линию старта хроматографической пластины микрокапилляром наносят 20|мкл испытуемого раствора и 10|мкл растворов сравнения рутина, гиперозида, галловой кислоты.

Хроматографическую камеру предварительно выстилают фильтровальной бумагой, насыщают в течение 40|мин подвижной фазой. После прохождения фронтом растворителей около 15|см, пластину вынимают, высушивают при комнатной температуре до удаления запаха растворителей.

В УФ-свете при длине волны 365|нм на хроматограмме должны быть видны три основные зоны адсорбции, соответствующие растворам сравнения рутина Rf около 0,55, гиперозида Rf около 0,60, имеющие оранжевую флюоресценцию, галловой кислоты Rf около 0,90, имеющую ярко-голубую флюоресценцию. Допускается наличие других нехарактерных зон адсорбции.

Хроматограмму обрабатывают 1|% раствором дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира и 5|% раствором макрогола 400, оценивают в дневном свете.

Предлагаем установить норму содержания сухого остатка для НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого не менее 1,5|%; НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого не менее 1,0|%.

Предлагаем установить норму по показателю «Плотность» для НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого от 0,880 до 0,900; для НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого от 1,004 до 1,024.

Предлагаем установить норму величины pH от 3,0 до 4,5.

По показателю «Содержание фенольных соединений в пересчете на кислоту галловую» предлагаем установить норму для НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого не менее 1,5|%, для НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого не менее 2,5|%.

Была изучена стабильность НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого при хранении по всем показателям качества, которые разработаны в проектах ФС. На 5 сериях образцов в процессе хранения установлен срок годности для НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого 2 года. По истечении 3-х лет хранения образцы настоек соответствуют требованиям проектов ФС. Изучение стабильности при хранении продолжается.

Исследования показателей качества НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого не выявили значимых различий. По результатам исследований разработан проект ФС «Настойка гомеопатическая матричная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe».

По результатам исследований НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого разработан проект ФС «Настойка гомеопатическая матричная ферментированная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe ferm 1.2».

Разработка показателей качества и установление срока годности НГМ и НГМФ хвоща полевого

Для характеристики НГМ и НГМФ хвоща полевого предложены следующие показатели качества: состав настойки, описание, подлинность, сухой остаток, содержание спирта (для НГМ), плотность, величина pH (для НГМФ), тяжелые металлы, микробиологическая чистота, количественное определение суммы фенольных соединений в пересчете на кислоту хлорогеновую.

НГМ хвоща полевого представляет собой жидкость темно-коричневого цвета со слабым ароматным запахом. НГМФ хвоща полевого – жидкость темно-коричневого цвета со слабым ароматным запахом.

Критерии подлинности НГМ и НГМФ включают качественные реакции на наличие фенольных соединений: реакция с 2|% спиртовым раствором алюминия хлорида, цианидиновая проба. Подлинность настоек предлагаем определять методом ТСХ с обнаружением фенольных соединений.

НПФ – готовые хроматографические пластины «Силикагель 60 F254 Merck», ПФ – БУВ (8:1:1). Испытуемый раствор: НГМ (НГМФ).

Раствор сравнения: 1|% растворы хлорогеновой кислоты, апигенин-7-гликозида, кверцетина в метаноле.

На линию старта хроматографической пластины микрокапилляром наносят 20 мкл испытуемого раствора и 10|мкл растворов сравнения хлорогеновой кислоты, апигенин-7-гликозида, кверцетина.

Хроматографическую камеру предварительно выстилают фильтровальной бумагой, насыщают в течение 40|мин ПФ. После прохождения фронтом растворителей 15|см, пластину вынимают, высушивают при комнатной температуре до удаления запаха растворителей.

В УФ-свете при длине волны 365|нм на хроматограмме должны быть видны три основные зоны адсорбции, соответствующие растворам сравнения хлорогеновой кислоты Rf около 0,40, имеющей ярко-голубую флюоресценцию, апигенин-7-гликозида Rf около 0,70, кверцетина Rf около 0,85, имеющим оранжевую флюоресценцию.

Хроматограмму обрабатывают 1|% раствором дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира и 5|% раствором макрогола 400, оценивают в дневном свете.

Предлагаем установить норму содержания сухого остатка для НГМ хвоща полевого – не менее 1,0|%, для НГМФ хвоща полевого не менее 2,5|%. Предлагаем установить норму по показателю «Плотность» для НГМ от 0,950 до 0,970, для НГМФ от 1,015 до 1,035.

Для НГМФ хвоща полевого определяют величину pH. По результатам исследований предлагаем установить норму величины pH от 3,0 до 4,5.

По показателю «Содержание фенольных соединений в пересчете на кислоту хлорогеновую» предлагаем установить норму для НГМ и НГМФ
не менее 0,5|%.

Была изучена стабильность НГМ и НГМФ хвоща полевого при хранении по всем показателям качества, которые разработаны в проектах ФС. На 5 сериях образцов в процессе хранения установлен срок годности для НГМ и НГМФ хвоща полевого 2 года. По истечении 3-х лет хранения образцы настоек соответствуют требованиям проектов ФС. Изучение стабильности при хранении продолжается.

По результатам исследований разработаны проекты ФС «Настойка гомеопатическая матричная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense», «Настойка гомеопатическая матричная ферментированная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense ferm 2.2».

Анализ гомеопатических разведений НГМ и НГМФ

Гомеопатические разведения НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, НГМ и НГМФ хвоща полевого изготавливали по методикам, указанным в ОФС 42-0027-05 «НГМ» и ОФС 42-0008-02 «НГМФ».

Первое десятичное разведение (D1), второе десятичное разведение (D2) и третье десятичное разведение (D3) исследуемых настоек при предварительном выпаривании дают положительные результаты при проведении качественных реакций на наличие фенольных соединений. Более высокие гомеопатические разведения при проведении качественных реакций на наличие фенольных соединений дают отрицательный результат.

Подлинность гомеопатических разведений D1, D2, D3 исследуемых настоек целесообразно устанавливать методом ТСХ по разработанной методике. В качестве испытуемого раствора предлагаем использовать 10 мл разведения D1, 10 мл разведения D2 и 20 мл разведения D3, предварительно выпаренных до 1 мл.

На хроматограммах испытуемых растворов гомеопатических разведений D1, D2 и D3 должны обнаруживаться зоны адсорбции, идентичные зонам испытуемых растворов НГМ и НГМФ, но слабой интенсивности. В испытуемых растворах более высоких гомеопатических разведений основные зоны адсорбции не обнаруживаются.

4. Разработка суппозиториев ректальных гомеопатических

на основе НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого

В ряде случаев наряду с применением таких гомеопатических лекарственных форм, как гранулы гомеопатические, таблетки гомеопатические, гомеопатические лекарственные растворы для инъекций
и т. д., клинически обоснованным является применение суппозиториев ректальных.

Разработана технологическая схема производства суппозиториев ректальных гомеопатических. Суппозитории готовили методом выливания в формы с объемом гнезда 3,0 см3. НГМФ в соответствующих разведениях вводили в суппозиторную массу в соотношении 1:10.

Состав на один суппозиторий: НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого D1 0,3 г; твин-80 0,05 г; твердый жир тип А 2,65 г. Масса суппозиториев составляла 2,90-3,05 г.

Результаты исследования показали стабильность суппозиториев ректальных гомеопатических в процессе хранения в течение 30 мес. Предлагаем установить срок годности суппозиториев – 2 года.

По результатам исследований разработан проект ФСП «Каланхоэ ферм суппозитории ректальные гомеопатические».

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

  1. Проведен сравнительный фармакогностический анализ свежесобранного сырья каланхоэ Дегремона и каланхоэ перистого: установлены значимые макро- и микроскопические диагностические признаки, товароведческие показатели, разработаны методики качественного и количественного анализа фенольных соединений.
  2. С помощью методов ТСХ, ВЭЖХ проведены сравнительные исследования фенольных соединений НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого, разработаны методики их стандартизации. Идентифицированы рутин, гиперозид, галловая, п-кумаровая кислоты, кверцетин. В НГМ каланхоэ Дегремона и НГМ каланхоэ перистого также идентифицированы кофейная кислота и кемпферол. С помощью метода дифференциальной спектрофотометрии разработаны методики количественного определения суммы фенольных соединений в НГМ каланхоэ Дегремона, НГМ каланхоэ перистого, НГМФ каланхоэ Дегремона/перистого в пересчете на кислоту галловую (относительная ошибка методик не превышает соответственно 3,52|%, 2,71|% и 2,53|%).
  3. С помощью методов ТСХ, ВЭЖХ проведены исследования фенольных соединений и разработаны методики стандартизации НГМ и НГМФ хвоща полевого. Идентифицированы кверцетин, апигенин-7-гликозид, кемпферол, хлорогеновая, п-кумаровая, феруловая кислоты. С помощью метода дифференциальной спектрофотометрии разработаны методики количественного определения суммы фенольных соединений в НГМ и НГМФ хвоща полевого в пересчете на кислоту хлорогеновую (относительная ошибка методик не превышает соответственно 5,09|% и 5,39|%).
  4. Разработаны методики установления подлинности гомеопатических разведений НГМ и НГМФ каланхоэ и хвоща.
  5. Разработаны проекты ФС «Побеги каланхоэ свежие», «Настойка гомеопатическая матричная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe», «Настойка гомеопатическая матричная ферментированная каланхоэ – Tinctura materna homoeopathica Kalanchoe ferm 1.2», «Настойка гомеопатическая матричная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense», «Настойка гомеопатическая матричная ферментированная хвоща полевого – Tinctura materna homoeopathica Equisetum arvense ferm 2.2».
  6. Разработан проект ФСП «Каланхоэ ферм суппозитории ректальные гомеопатические».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

  1. Волжанова М.И., Суслина С.Н., Вандышев В.В., Байльман Р.А.,
    Давыдова В.К. Матричная настойка Bryophyllum ferm 33b. Материалы VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке», 23-26 ноября 2006 г. – С.112.
  2. Волжанова М.И., Суслина С.Н., Байльман Р.А. Методики стандартизации гомеопатических матричных ферментированных настоек на примере Bryophyllum e foliis ferm 33 b. Вестник РУДН, раздел «Медицина», 2008. – 19-25 с.
  3. Волжанова М.И., Суслина С.Н., Байльман Р.А. Стандартизация матричной настойки Bryophyllum e foliis ferm 33 b. Сборник материалов XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 14-18 апреля 2008 г. – С. 532.
  4. Волжанова М.И., Байльман Р.А. Способ идентификации матричных настоек Steigbild. Тезисы докладов XVIII Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». – М.: ВАЛАНГ, 2008. – 128-129 с.
  5. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н. Особенности технологии приготовления настоек гомеопатических матричных ферментированных (WALA-метод). Тезисы докладов XIX Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». – М.: ВАЛАНГ, 2009. – 111-112 с.
  6. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н. Сравнительный анализ качественного состава фенольных соединений в настойке гомеопатической матричной и настойке гомеопатической матричной ферментированной хвоща полевого. Тезисы докладов XIX Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». – М.: ВАЛАНГ, 2009. – 112-113 с.
  7. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н. Некоторые теоретические и практические аспекты антропософской фармации. Гомеопатический ежегодник. – М.: ВАЛАНГ, 2009. – 133-139 с.
  8. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н. Разработка разделов проекта фармакопейной статьи на настойку гомеопатическую матричную ферментированную Kalanchoe daigremontiana/pinnata e foliis ferm. Сборник материалов XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 6-10 апреля 2009 г. – С. 633.
  9. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н. Разработка разделов проекта фармакопейной статьи на настойку гомеопатическую матричную ферментированную Equisetum arvense ex herba ferm. Сборник материалов XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 6-10 апреля 2009 г. – С. 633.
  10. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н. К вопросу о стандартизации настоек гомеопатических матричных ферментированных. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, №1,
    2009. – 40-46 с.
  11. Волжанова М.И., Суслина С.Н., Копнин А.А., Байльман Р.А. Изучение количественного содержания фенольных соединений в сырье, настойках гомеопатических матричных и ферментированных каланхоэ и хвоща. Тезисы докладов XX Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». – М.: ВАЛАНГ, 2010. – 125-127 с.
  12. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н. Разработка лекарственных форм на основе настойки гомеопатической матричной ферментированной каланхоэ перистого и каланхоэ Дегремона. Тезисы докладов XX Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». – М.: ВАЛАНГ, 2010 – 127-129 с.
  13. Волжанова М. И., Байльман Р. А., Суслина С. Н. Применение гомеопатических лекарственных средств на основе каланхоэ перистого и каланхоэ Дегремона. Гомеопатический ежегодник. – М.: ВАЛАНГ, 2010 – 150-155 с.
  14. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н., Быков В.А. Каланхоэ перистое и Дегремона: химический состав, применение в медицине (обзор). Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, 2010.


 



Похожие работы:

«Кирьякова Виктория Олеговна ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОДА URTICA, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ АЛТАЙСКОГО КРАЯ 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Пермь – 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Алтайский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской...»

«КОЛОМИЕЦ НАТАЛЬЯ ЭДУАРДОВНА Фармакогностическое исследование рода EQUISETUM l. флоры Сибири как источника лекарственных средств 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук Москва – 2010 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению (ГОУ ВПО...»

«Полуэктова Татьяна Викторовна РАЗРАБОТКА СОСТАВА И СТ АНДАРТИЗАЦИ Я СБОРА, ОБЛАДАЮЩЕГО ЭСТРОГЕНОПОДОБНЫМ ДЕЙСТВИЕМ 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Самара – 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования Сибирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской...»

«ЯРУШОК Татьяна Александровна ИЗУЧЕНИЕ БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ РАСТВОРИМОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ИЗ ПЕРЕЧНЯ ЖИЗНЕННО НЕОБХОДИМЫХ И ВАЖНЕЙШИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ (ЖНВЛП) 14.04.02 – Фармацевтическая химия, фармакогнозия А в т о р е ф е р а т диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук Москва – 2013 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России Научный руководитель: доктор...»

«НГУЕН ТХИ НЬЫ КУИНЬ ИЗУЧЕНИЕ МИНЕРАЛЬНОГО СОСТАВА ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОДЕРЖАЩЕГО ЭФИРНЫЕ МАСЛА 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва - 2013 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России Научный руководитель : доктор фармацевтических наук, доцент Гравель Ирина Валерьевна Официальные...»

«Кабанова Татьяна Владимировна ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ НОВЫХ ПОЛИМЕРНЫХ НОСИТЕЛЕЙ НА ОСНОВЕ ИНТЕРПОЛИМЕРНЫХ КОМПЛЕКСОВ С УЧАСТИЕМ РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ КАРБОПОЛА 14.04.01 – технология получения лекарств Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва – 2010г. Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по...»

«Валиева Екатерина Марсиловна Разработка подходов к оптимизации обеспечения детей фармацевтическими средствами, содержащими пробиотики 14.04.03 – Организация фармацевтического дела автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Пермь – 2012 Диссертационная работа выполнена в ГБОУ ВПО Казанский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России Научный руководитель: Доктор фармацевтических наук, профессор Егорова Светлана...»

«Тихонова Наталья Викторовна РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ТВЕРДЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ДИЛЕПТА 14.04.01 – технология получения лекарств АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва – 2013 Диссертационная работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Научно-исследовательском институте фармакологии имени В.В. Закусова Российской академии медицинских наук (ФГБУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН) Научный...»

«Казанцева Мария Ивановна РЕАКЦИЯ ГАНЧА В РЯДУ ЭФИРОВ И АМИДОВ АЦЕТИЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЛУЧЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ Специальность 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук Пермь-2012 Диссертационная работа выполнена в ГБОУ ВПО Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России Научный руководитель: доктор химических наук, профессор Гейн...»

«Дворникова Любовь Габдулбариевна ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КУКУРУЗЫ СТОЛБИКОВ С РЫЛЬЦАМИ И СОЗДАНИЕ НА ИХ ОСНОВЕ ПРЕПАРАТОВ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ 14.04.01 – технология получения лекарств 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Пермь – 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Алтайский государственный...»

«БАЛАХОНОВА Елена Геннадьевна МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ОПТИМИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ ЖИТЕЛЕЙ СЕЛЬСКИХ НАСЕЛЕННЫХ ПУНКТОВ 14.04.03 – организация фармацевтического дела Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Пермь – 2012 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального...»

«Буланкин Денис Георгиевич ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО ( GINKGO BILOBA L.) 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Самара – 2011 Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Самарский государственный медицинский университет Министерства...»

«Краснюк Иван Иванович Повышение биодоступности лекарственных форм с применением твердых дисперсий 14.04.01 – технология получения лекарств, 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук Москва – 2010 г. Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова. Научные консультанты: доктор фармацевтических наук, доктор медицинских наук, профессор Хабриев Рамил Усманович...»

«Сулейманова Лилия Ривхатовна ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ ПЕРЦА ОДНОЛЕТНЕГО ( СAPSICUM ANNUUM L.) 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Самара – 2011 Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития...»

«Нестерова Дилфия Фатыховна НАУЧНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ОПТИМИЗАЦИИ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ АПТЕКИ МЕДИЦИНСКОЙ ОРГАНИЗАЦИИ (НА УРОВНЕ СТАЦИОНАРНОЙ ПОМОЩИ) специальность 14.04.03 – организация фармацевтического дела АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва - 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Башкирский государственный медицинский университет Министерства...»

«МЕТЕЛКИН ИВАН АНДРЕЕВИЧ РАЗРАБОТКА МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ К КЛИНИКО-ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ МЕДИЦИНСКОЙ ТЕХНОЛОГИИ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ПИТАНИЯ Специальность 14.04.03 – организация фармацевтического дела Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва – 2013 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации. Научный руководитель: доктор...»

«джупарова ирина алексеевна Теоретические и методические основы построения фармакогеографической модели модернизации системы управления лекарственным обеспечением больных социально значимыми заболеваниями на региональном уровне 14.04.03 – Организация фармацевтического дела автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук Москва – 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«Елькина Ольга Викторовна ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛЬНЯНКИ ОБЫКНОВЕННОЙ, ПРОИЗРАСТАЮЩЕЙ В ПЕРМСКОМ КРАЕ Специальность 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Пермь – 2012 Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и...»

«Бобылева Александра Александровна СИНТЕЗ, СВОЙСТВА И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ 1-(3-АЛКОКСИПРОПИЛ)-4-АЦИЛ(2-ТИЕНОИЛ)-5-АРИЛ(3-ПИРИДИЛ)-3-ГИДРОКСИ-3-ПИРРОЛИН-2-ОНОВ Специальность 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Пермь 2012 Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Пермская государственная...»

«ДУДАРЕНКОВА Марина Рудольфовна РАЗРАБОТКА ОРГАНИЗАЦИОННО-ЭКОНОМИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ К АПТЕЧНОМУ ИЗГОТОВЛЕНИЮ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ТЕРРИТОРИАЛЬНОМ УРОВНЕ (НА ПРИМЕРЕ ОРЕНБУРГСКОЙ ОБЛАСТИ) 14.04.03 организация фармацевтического дела Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук, доцент ГЛАДУНОВА Елена Павловна Пермь - 2011 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Самарский государственный...»


















 
2014 www.avtoreferat.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.